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핵산 증폭 및 분석

다음은 어떤 세균 감염 시료에서 특정 내성 유전자를 정량하기 위해 수행한 실시간 중합효소 연쇄반응(qPCR) 결과이다. 이 결과에 대한 해석으로 옳은 것은?

표준곡선: 102~106 copies/μL 범위에서 직선성(R² = 0.998), 기울기 = -3.32, 절편 = 38.5
시료 A: Cq = 22.1
시료 B: Cq = 35.8
시료 C: Cq = 39.4 (음성 대조군 Cq = 39.1)
PCR 효율: 100.2%
해설
qPCR에서 표준곡선의 기울기는 PCR 효율(E)과 -1/log(1+E) 관계에 있다. 기울기가 -3.32이면 E ≈ 100%로 계산되며, 이는 각 사이클마다 주형 분자 수가 약 2배씩 증폭됨을 의미한다. 이상적인 기울기는 -3.32이다. 선택지 1: 시료 C의 Cq(39.4)가 음성 대조군 Cq(39.1)과 거의 동일하거나 높으므로, 이는 오염이나 비특이적 증폭 가능성이 있어 양성으로 판정할 수 없다. 일반적으로 Cq가 음성 대조군과 2 사이클 이내이면 양성으로 판정하지 않는다. 선택지 3: Cq값이 낮을수록 초기 주형 농도가 높다. 시료 A(Cq=22.1)는 시료 B(Cq=35.8)보다 초기 농도가 훨씬 높다. 선택지 4: 표준곡선 범위(10²~10⁶ copies/μL)에서 Cq 35.8은 10² copies/μL에 해당하는 Cq ≈ 32~33보다 높아 범위를 약간 벗어날 수 있으나, 이것만으로 정량값을 완전히 신뢰할 수 없다고 단정하기보다는 범위 외 외삽임을 표시하는 것이 정확하다. 그러나 선택지 2가 명백히 옳은 해석이다. 선택지 5: R² = 0.998은 매우 우수한 직선성을 나타내며, 허용 기준(R² ≥ 0.99)을 충족한다.
같은 주제 다음 문제역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 이용하여 특정 유전자의 mRNA 발현을 분석하고자 한다. 실험 설계 과정에서 게놈 DNA 오염에 의한 위양성 결과를 방지…이 문제가 수록된 문제집[2027 국시대비] 실전 문제로 끝내는 분자생물학 문제은행12,900원
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