1. 라이트 염색에서 완충액 pH는 왜 중요한가요?

라이트 염색 색소는 산성 색소(에오신)와 염기성 색소(메틸렌블루와 그 산화 산물)가 섞여 있습니다. 세포 성분은 pH에 따라 전하가 바뀌므로 완충액 pH가 달라지면 어느 색소에 붙는지가 달라집니다. 많은 제조사가 pH 6.8 인산 완충액을 권합니다.

완충액이 너무 산성이면 적혈구와 호산구가 붉어지고 핵이 흐려지며, 너무 알칼리성이면 푸르게 치우쳐 세포질 구조가 뭉개집니다. 물도 영향을 줍니다. 수돗물은 pH가 일정하지 않을 수 있어 증류수나 탈이온수를 쓰도록 안내하는 경우가 많습니다.

그림 2-1. 염색된 말초혈액 도말 슬라이드 — 고른 분홍보라 색조와 깃털 모양 끝을 보여 줍니다.

마이메르시 제작 · 일러스트 (gpt-image-2 생성 예정)

2. 너무 파랗거나 너무 붉게 염색되면 무엇을 먼저 보나요?

순서가 중요합니다. 시약을 새로 만들기 전에 검체, 도말, 완충액, 시간을 먼저 봅니다.

염색 시간을 바꿀 때는 기관 절차서에 정해진 범위에서 조절하고, 한 번에 한 가지만 바꾸어 원인을 구분합니다. 자동 염색기를 쓰는 곳은 프로그램과 시약 교환 주기를 함께 확인합니다.

3. 항산성 염색은 왜 산에도 색이 안 빠지나요?

결핵균 같은 항산균은 세포벽에 마이콜산 같은 지질이 많아 염색약이 한 번 들어가면 산-알코올 탈색에도 잘 빠지지 않습니다. 그래서 일반 염색이 어렵고, 가열(칠-닐센)이나 석탄산 사용으로 염색약을 안으로 밀어 넣습니다. 탈색 뒤에도 붉게 남으면 항산성, 대조염색의 푸른색으로 바뀌면 비항산성입니다.

형광 염색(오라민 O)은 같은 원리지만 저배율에서 빨리 훑을 수 있어 검체가 많은 곳에서 쓰이고, 양성은 어두운 배경 위의 밝은 형광으로 보입니다. 위양성을 줄이기 위해 양성 의심 슬라이드는 다른 판독자나 칠-닐센 염색으로 확인하는 기관이 있습니다.

4. 항산균은 몇 시야를 보고 어떻게 보고하나요?

보고 기준은 같은 면적에서 센 균 수가 바탕입니다. 널리 인용되는 ECDC·WHO 계열 표에서는 칠-닐센 도말을 1000배로 볼 때 100시야에서 균이 1~9개면 정확한 개수를 적고, 10~99개면 1+로 보고합니다. 이보다 많으면 한 시야당 균 수와 시야 수에 따라 2+, 3+로 올라갑니다. 음성 보고 전 읽는 시야 수도 자료마다 다르게 안내되므로(100시야 또는 그 이상) 기관 절차서 확인이 필요합니다.

5. 오일 오염과 슬라이드 재사용은 왜 문제가 되나요?

항산균 염색은 양성 도말에서 오일과 염색 용기를 통해 균이 옮겨 가기 쉽습니다. 염색 용기와 염색액을 여과·교체 없이 계속 쓰거나, 유침 렌즈 오일이 슬라이드 사이에서 옮겨 가면 음성 슬라이드에 균이 생긴 것처럼 보입니다. 새 슬라이드를 쓰고, 양성 의심 슬라이드는 따로 두며 렌즈를 닦습니다.

1. 염색 용기를 검체마다 바꾸거나 철저히 씻습니다.
2. 양성 대조와 음성 대조를 함께 염색합니다.
3. 양성 슬라이드를 본 뒤에는 대물렌즈를 닦습니다.