(1) 분리모드와 이동상 설계

① 역상·순상과 그 밖의 분리모드

역상(C18, C8)은 무극성 고정상에 극성 이동상을 조합해 분석 대부분을 차지하고, 순상은 극성 고정상에 무극성 이동상을 써 저극성 성분이 먼저 용리된다.

이온교환은 정전기적 결합, 크기배제는 세공 출입으로 큰 분자가 먼저, 친화 크로마토그래피는 특이 결합이다.

② 이동상 조성·pH·이온쌍시약

이동상 조성은 유기용매 비율을 높이면 역상 용리력이 커져 머무름시간이 짧아지고, pH와 완충액 선택상 비이온형일수록 강하게 붙는다.

이온쌍시약(옥탄설폰산나트륨)은 겉보기 소수성을 높여 머무름을 늘리고, 등용매 용리와 기울기 용리 중 후자는 극성 폭이 넓은 시료용이다.

③ 검출기의 특성 비교

검출기(UV-Vis, PDA, 형광, RI, ELSD, CAD, MS) : 발색단은 UV-Vis · PDA는 피크 순도 · 형광은 고감도 · 적용 제한 · RI는 범용 · 저감도 · 기울기 용리 불가 · ELSD · CAD는 발색단 없는 비휘발성 · MS는 구조 추정 · 미량 정량

④ 분리모드 비교표

(2) 칼럼 조건과 국시 적용

① 입자경·온도·카이랄 분리

컬럼 입자경(3~5 μm vs sub-2 μm UPLC)과 배압은 반비례여서 입자가 작을수록 배압은 급상승하나 HETP가 낮아 이론단수는 높다.

컬럼 온도와 머무름도 반비례라 온도 상승 시 배압과 머무름시간이 낮아지고, 카이랄 컬럼에 의한 광학이성질체 분리는 역상으로 안 된다.

② 함량·유연물질·용출액 정량에의 적용

함량 시험은 표시량 대비 백분율을, 유연물질 시험은 개별 · 총 불순물 한도를 확인하고, 용출액 정량에의 적용에서는 시점별 용출률을 구한다.

KP 액체크로마토그래프법은 장치 · 조작조건 · 시스템적합성을 규정하고, 이동상 탈기는 기포 노이즈를 막으며 주입량 · 시스템 밸리데이션도 규정을 따른다.