(1) 흡광 원리와 정량 기본식

① Lambert-Beer 법칙과 흡광도의 정의

자외가시부흡수스펙트럼법은 자외부 · 가시부 흡수로 원료의약품을 확인 · 정량한다.

Lambert-Beer 법칙(A=εbc) : 흡광도는 몰흡광계수 ε · 층장 b(cm) · 농도 c에 정비례 · 농도 2배면 흡광도 2배 증가

A=2-logT 관계로 투과도 T가 감소할수록 흡광도는 증가하며 직선 구간에서만 정량한다.

② 몰흡광계수와 비흡광도, 최대흡수파장

몰흡광계수 ε과 비흡광도 E1%1cm : ε은 1 mol/L · 1 cm 기준 · E1%1cm는 1 w/v% · 1 cm 기준 · ε은 비흡광도×분자량÷10

최대흡수파장 λmax와 흡수극대비는 확인시험 지표로 규정 범위와 대조

③ 흡광 상수 비교표

(2) 구조에 따른 흡수 이동과 정량 조작법

① 발색단, 조색단과 색이동

발색단은 이중결합 · 카보닐 같은 불포화 구조 · 조색단은 비공유전자쌍으로 공액되어 흡수를 강화하는 하이드록시기 · 아미노기

색이동 : bathochromic은 장파장 · hypsochromic은 단파장 이동 · hyperchromic은 흡광도 증가 · 공액계가 길어지면 두 효과 동반

Woodward-Fieser 규칙은 다이엔 · 엔온 기본값에 치환기 증분을 더해 λmax 예측

② 검량선법과 그 밖의 정량법 선택

검량선법은 여러 표준액 직선에 내삽 · 1점 비교법은 한 점 비교라 좁은 직선 범위에서만 · 표준첨가법은 매트릭스 간섭 시 외삽

차이분광법은 두 상태 스펙트럼 차로 방해 흡수 상쇄 · 미분분광법은 겹친 봉우리 분리 · 이성분 혼합물 동시정량(연립방정식)은 두 파장으로 동시 산출

(3) 직선성 이탈과 측정 조건

① Beer 법칙 이탈 원인과 셀, 용매 선택

Beer 법칙 이탈 원인 : 고농도는 용질 상호작용 · 굴절률 변화 · 미광은 잡광 유입으로 과소 측정 · 화학평형은 해리 · 회합으로 흡수종 비율 변화

용매의 투과한계와 셀 선택 : 투과한계 파장이 측정 파장보다 짧을 것 · 자외부는 석영셀 · 가시부는 유리셀이나 플라스틱셀