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조직검체 종류(부위별 방법)
| 부위 | 방법 |
|---|---|
| 피부 | 펀치·절제 |
| 위장관·기관지 | 내시경 겸자생검 |
| 간·콩팥 | 바늘생검 |
| 유방·전립샘·골수·림프절·근 | 부위별 생검 |
Gross cutting(육안 절취)
주요 수치
| 항목 | 값 |
|---|---|
| 포매용 조직편 크기 | 약 1×2×0.4 cm |
| 펀치생검 | 1~8 mm 둥근칼 |
| 간 절취 | 절제면 수직 0.5 cm 간격 연속절 |
핵심 키워드: 절제·절개·바늘생검, Gross cutting, 절제연, 1×2×0.4 cm, 펀치 1~8 mm
고정제 종류와 특성 ★★핵심
| 고정제 | 특성·용도 |
|---|---|
| 포름알데히드(포르말린 10%) | 표준 고정제, 가교 결합 |
| 글루타르알데히드 | 전자현미경용, 미세구조 보존 우수 |
| 사산화오스뮴(OsO₄) | 지질 고정·전자현미경용 |
| 피크린산(Bouin액) | 글리코겐·내분비 조직 |
| 알코올 | 탈수·침전 고정, 글리코겐 보존 |
| 염화제2수은(승홍) | 침투 빠름·염색성 우수(색소 침착 주의) |
| 중크롬산칼륨·초산·아세톤 | 목적별 사용 |
고정법: 화학적 고정(효소·화학 반응), 물리적 고정(열·냉동·건조).
주요 고정액 조성·조건
| 고정액 | 조성/조건 |
|---|---|
| 10% 포르말린 | 3740% formalin 1 : 증류수 9(vol), 12일 |
| NBF(중성완충포르말린) | 3일, 가능하면 4℃ |
| Carnoy액 | 무수에탄올60·클로로폼30·빙초산10, 2~3시간, 고정 후 무수에탄올 탈수 |
| Bouin액 | 피크르산포화75·포르말린15·빙초산5, 2~3시간, 수세 없이 70% 에탄올 탈수 |
| Zenker(승홍계) | 6~8시간, 탈승홍 과정 필요 |
| Helly | 1~6시간 |
승홍 착색 피크린산 제거: 5070% 에탄올 또는 탄산리튬 포화용액. 고정액 양: 조직의 1520배. 폐 주입고정: 약 30 cm 정수압.
카이저링 박물표본 고정
| 액 | 조성/조건 |
|---|---|
| I액 | 40% formalin |
| II액 | 80% ethanol |
| III액 | pH 8.0 |
목적: 장기의 원래 색 보존·보관.
핵심 키워드: 10% 포르말린, 글루타르알데히드, OsO₄, Bouin·Carnoy·Zenker, 15~20배, 카이저링
탈회
| 구분 | 내용 |
|---|---|
| 탈회제 | 산(질산·염산·포름산), 킬레이트제(EDTA) |
| 종료 확인 | 물리적(바늘), 화학적(수산화암모늄·수산암모늄 칼슘 검출), X선 |
| 탈회액 양 | 조직부피의 10~20배, 매일 새 용액 교환, 실온 |
| 화학적 종료 확인 | 탈회액 5 mL를 2N NaOH로 중화 후 5% oxalate 첨가 → 혼탁 없으면 완료 |
조직처리 단계
| 단계 | 내용 |
|---|---|
| 탈수 | 물을 알코올로 단계 제거(70 → 80 → 95 → 100%) |
| 투명 | 알코올을 자일렌(xylene)으로 치환 |
| 침투 | 녹인 파라핀 침투(융점 56~60℃) |
| 포매 | 파라핀 블록으로 굳힘(가장 흔함), 방향 정렬 |
| 박절 | 회전식 박절기로 35μm 박절, 부유온수조(40~45℃) 신전 |
| 봉입 | 봉입제(Canada balsam·합성수지)로 커버글라스 밀봉 |
포매 종류: 파라핀(가장 흔함), 셀로이딘(크고 단단한 뼈·눈), epoxy resin(전자현미경용).
주요 절편 제작 수치
| 항목 | 값 |
|---|---|
| 포매 다듬기 여백 | 조직 주위 2~3 mm |
| 셀로이딘 포매 | 12%, 박절 전 80% 에탄올 30~60분 경화 |
| 박절 당기는 각 | 회전식 90°, 활주식 45° |
| 부유온수조 | 45℃ |
| 슬라이드 부착 후 신전기 | 60℃ 1시간 건조 |
| 토리(사구체)질환 감별 절편 두께 | 2 μm 이내 |
| 동결절편 지방 빙점 | −25~−35℃ |
동결절편
핵심 키워드: EDTA, 탈수 70→100%, 자일렌, 파라핀 56~60℃, 2 μm, OCT·크라이오스탯, 동결절편
색소 원리: 발색단(색 내는 원자단) + 조색단(조직 결합·염색성 부여).
염색 분류
| 색소 | 표적 | 예 |
|---|---|---|
| 산성색소 | 세포질 | 에오신 |
| 염기성색소 | 핵 | 헤마톡실린 |
| 중성색소 | — | — |
H&E 염색 ★빈출
| 색소 | 성질 | 표적·색 |
|---|---|---|
| 헤마톡실린 | 염기성(매염제 명반 결합) | 핵-청자색 |
| 에오신 | 산성 | 세포질-분홍색 |
감별(분별): 1% HCl alcohol. 청색화: 암모니아수.
효소조직화학
핵심 키워드: 발색단·조색단, 산성·염기성색소, 헤마톡실린, 에오신, 1% HCl alcohol, 암모니아수
결합조직 섬유별 염색 ★★핵심
| 표적 | 염색법 | 색 |
|---|---|---|
| 콜라겐(교원섬유) | Masson trichrome | 청색·녹색 |
| 콜라겐 | van Gieson | 적색(acid fuchsin) |
| 탄력섬유 | Verhoeff | 흑색 |
| 탄력섬유 | resorcin-fuchsin(Weigert) | 흑청색 |
| 탄력섬유 | Unna orcein | 암갈색(분별 70% 알코올) |
| 세망섬유 | 은염색(Gomori) | 흑색 |
삼색염색 비교
| 염색법 | 아교/교원섬유 | 근섬유·핵 | 비고 |
|---|---|---|---|
| Masson trichrome | 청색(aniline blue) | 근섬유 적색 | 후고정(매염) Bouin |
| Van Gieson | 교원섬유 적색(acid fuchsin) | 근섬유·적혈구 노란색(picric acid) | — |
| Heidenhain AZAN | 아교·기저막 청색 | 근섬유·핵 적색 | 토리(사구체)신염 진단 |
세망섬유 도은: 암모니아성 은용액 pH 11~12 → 흑색(호은성). PTAH: hematoxylin : phosphotungstic acid = 1:20, 횡문근육종 확진 유용.
기저막 은염색(PAM)
동일 기저막 염색 비교
| 염색법 | 색 |
|---|---|
| PAM | 흑색 |
| PAS | 적색 |
| AZAN | 청색 |
뼈·근·신경·핵산 조직 염색
| 표적 | 염색법 | 색/비고 |
|---|---|---|
| 뼈조직(석회화) | von Kossa | 흑색 |
| 뼈대근조직 | PTAH | 가로무늬 |
| 신경조직(닛슬소체) | Nissl | — |
| 축삭·신경원섬유 | Bodian·은염색 | — |
| DNA | Feulgen 반응 | 적자색 |
| DNA/RNA 동시 | 메틸그린-파이로닌 | DNA 녹색(Methyl green pH 9)·RNA 적색(Pyronin pH 1.5) |
| 근섬유형 | ATPase 염색 pH 9.4 | I형 음성, II형 짙게 |
핵심 키워드: Masson trichrome, van Gieson, Verhoeff, Gomori 은염색, AZAN, PAM, PTAH, Feulgen
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