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조직검사학 1부

CHAPTER 03

조직검사학 (1부)

1.조직검체에 따른 육안조직표본검사

a. 핵심 개념

  • 조직검체는 목적에 따라 절제·절개·바늘·긁어냄 생검으로 채취.
  • Gross cutting은 고정 검체에서 대표 병변을 잘라 포매용 조직 제작.

b. 상세 설명

조직검체 종류(부위별 방법)

부위방법
피부펀치·절제
위장관·기관지내시경 겸자생검
간·콩팥바늘생검
유방·전립샘·골수·림프절·근부위별 생검

Gross cutting(육안 절취)

  • 고정 검체를 육안 관찰하며 병변 부위를 대표적으로 절취.
  • 크기·색·경도·병변 위치 기록.
  • 수술검체: 절제연(경계부)·림프절·병변 중심 포함해 계통적 채취(진단·병기 판정).

주요 수치

항목
포매용 조직편 크기약 1×2×0.4 cm
펀치생검1~8 mm 둥근칼
간 절취절제면 수직 0.5 cm 간격 연속절

c. ★ 시험 포인트

  • 간·콩팥 검체 채취법 → 바늘생검
  • 포매용 조직편 크기 → 약 1×2×0.4 cm
  • 펀치생검 둥근칼 지름 → 1~8 mm
  • 수술검체 절취 시 병기 판정에 필요한 부위 → 절제연·림프절·병변 중심

d. 한 줄 요약

📌 한 줄 요약: 조직검체는 부위별 생검으로 얻고, Gross cutting으로 고정 검체의 대표 병변을 약 1×2×0.4 cm 조직편으로 절취한다.

e. 핵심 키워드

핵심 키워드: 절제·절개·바늘생검, Gross cutting, 절제연, 1×2×0.4 cm, 펀치 1~8 mm

2.조직의 고정

a. 핵심 개념

  • 고정은 자가융해·부패 방지, 단백질 응고·경화로 조직 보존, 염색성 향상 목적.
  • 고정제는 화학적 특성·용도별로 구분, 포르말린 10%가 표준.
  • 고정에는 농도·pH·온도·두께·시간·양이 영향.

b. 상세 설명

고정제 종류와 특성 ★★핵심

고정제특성·용도
포름알데히드(포르말린 10%)표준 고정제, 가교 결합
글루타르알데히드전자현미경용, 미세구조 보존 우수
사산화오스뮴(OsO₄)지질 고정·전자현미경용
피크린산(Bouin액)글리코겐·내분비 조직
알코올탈수·침전 고정, 글리코겐 보존
염화제2수은(승홍)침투 빠름·염색성 우수(색소 침착 주의)
중크롬산칼륨·초산·아세톤목적별 사용

고정법: 화학적 고정(효소·화학 반응), 물리적 고정(열·냉동·건조).

주요 고정액 조성·조건

고정액조성/조건
10% 포르말린3740% formalin 1 : 증류수 9(vol), 12일
NBF(중성완충포르말린)3일, 가능하면 4℃
Carnoy액무수에탄올60·클로로폼30·빙초산10, 2~3시간, 고정 후 무수에탄올 탈수
Bouin액피크르산포화75·포르말린15·빙초산5, 2~3시간, 수세 없이 70% 에탄올 탈수
Zenker(승홍계)6~8시간, 탈승홍 과정 필요
Helly1~6시간

승홍 착색 피크린산 제거: 5070% 에탄올 또는 탄산리튬 포화용액. 고정액 양: 조직의 1520배. 폐 주입고정: 약 30 cm 정수압.

카이저링 박물표본 고정

조성/조건
I액40% formalin
II액80% ethanol
III액pH 8.0

목적: 장기의 원래 색 보존·보관.

c. ★ 시험 포인트

  • 가장 널리 쓰는 표준 고정제 → 10% 포르말린(가교 결합)
  • 전자현미경용 고정제 → 글루타르알데히드
  • 지질 고정·전자현미경용 고정제 → 사산화오스뮴(OsO₄)
  • 10% 포르말린 조성 → 37~40% formalin 1 : 증류수 9
  • 적정 고정액 양 → 조직의 15~20배
  • Bouin액 고정 후 탈수 → 수세 없이 70% 에탄올
  • 장기 원색 보존 박물표본법 → 카이저링법

d. 한 줄 요약

📌 한 줄 요약: 고정은 자가융해 방지·단백 경화·염색성 향상이 목적이며, 10% 포르말린이 표준이고 고정액 양은 조직의 15~20배로 한다.

e. 핵심 키워드

핵심 키워드: 10% 포르말린, 글루타르알데히드, OsO₄, Bouin·Carnoy·Zenker, 15~20배, 카이저링

3.일반조직·동결절편검사·뼈조직 절편제작

a. 핵심 개념

  • 뼈·석회화 조직은 탈회 후 절편 제작, 산·킬레이트제 사용.
  • 조직처리는 탈수 → 투명 → 침투 → 포매 → 박절 → 봉입 순.
  • 동결절편은 수술 중 신속 진단용, 지질·효소·항원 보존.

b. 상세 설명

탈회

구분내용
탈회제산(질산·염산·포름산), 킬레이트제(EDTA)
종료 확인물리적(바늘), 화학적(수산화암모늄·수산암모늄 칼슘 검출), X선
탈회액 양조직부피의 10~20배, 매일 새 용액 교환, 실온
화학적 종료 확인탈회액 5 mL를 2N NaOH로 중화 후 5% oxalate 첨가 → 혼탁 없으면 완료

조직처리 단계

단계내용
탈수물을 알코올로 단계 제거(70 → 80 → 95 → 100%)
투명알코올을 자일렌(xylene)으로 치환
침투녹인 파라핀 침투(융점 56~60℃)
포매파라핀 블록으로 굳힘(가장 흔함), 방향 정렬
박절회전식 박절기로 35μm 박절, 부유온수조(40~45℃) 신전
봉입봉입제(Canada balsam·합성수지)로 커버글라스 밀봉

포매 종류: 파라핀(가장 흔함), 셀로이딘(크고 단단한 뼈·눈), epoxy resin(전자현미경용).

주요 절편 제작 수치

항목
포매 다듬기 여백조직 주위 2~3 mm
셀로이딘 포매12%, 박절 전 80% 에탄올 30~60분 경화
박절 당기는 각회전식 90°, 활주식 45°
부유온수조45℃
슬라이드 부착 후 신전기60℃ 1시간 건조
토리(사구체)질환 감별 절편 두께2 μm 이내
동결절편 지방 빙점−25~−35℃

동결절편

  • 수술 중 신속 진단(약 10분) 가능, 형태 보존은 파라핀보다 떨어짐.
  • 포매제(OCT compound)로 얼려 크라이오스탯(cryostat)으로 박절.
  • 지질·효소·항원 보존 → 지질염색·면역염색에 사용.

c. ★ 시험 포인트

  • 킬레이트 탈회제 → EDTA
  • 토리(사구체)질환 감별용 절편 두께 → 2 μm 이내
  • 파라핀 융점 → 56~60℃
  • 크고 단단한 뼈·눈 조직의 포매 → 셀로이딘 포매
  • 전자현미경용 포매 → epoxy resin
  • 동결절편 신속 진단 소요 시간 → 약 10분
  • 회전식 박절기의 당기는 각 → 90°

d. 한 줄 요약

📌 한 줄 요약: 조직처리는 탈회 → 탈수 → 투명 → 침투 → 파라핀 포매 → 35μm 박절 → 봉입 순이며, 동결절편은 약 10분 신속 진단과 지질·효소·항원 보존이 장점이다.

e. 핵심 키워드

핵심 키워드: EDTA, 탈수 70→100%, 자일렌, 파라핀 56~60℃, 2 μm, OCT·크라이오스탯, 동결절편

4.염색이론 및 헤마톡실린-에오신

a. 핵심 개념

  • 색소는 발색단(색)과 조색단(결합)으로 발색·염색.
  • 산성색소는 세포질(에오신), 염기성색소는 핵(헤마톡실린) 염색.
  • H&E는 가장 기본 일반염색.

b. 상세 설명

색소 원리: 발색단(색 내는 원자단) + 조색단(조직 결합·염색성 부여).

염색 분류

색소표적
산성색소세포질에오신
염기성색소헤마톡실린
중성색소

H&E 염색 ★빈출

색소성질표적·색
헤마톡실린염기성(매염제 명반 결합)핵-청자색
에오신산성세포질-분홍색

감별(분별): 1% HCl alcohol. 청색화: 암모니아수.

효소조직화학

  • 효소 활성으로 위치를 색으로 표시. 영향 인자: 온도·pH·기질 농도·억제제.
  • 반응 종류: 인산가수분해효소(ALP·ACP), 산화환원효소, 에스터가수분해효소.

c. ★ 시험 포인트

  • 핵을 청자색으로 물들이는 색소 → 헤마톡실린(염기성)
  • 세포질을 분홍색으로 물들이는 색소 → 에오신(산성)
  • H&E 감별(분별)에 쓰는 용액 → 1% HCl alcohol
  • 청색화에 쓰는 용액 → 암모니아수
  • 색을 내는 원자단 → 발색단

d. 한 줄 요약

📌 한 줄 요약: H&E는 염기성 헤마톡실린이 핵을 청자색, 산성 에오신이 세포질을 분홍색으로 물들이는 기본 일반염색이다.

e. 핵심 키워드

핵심 키워드: 발색단·조색단, 산성·염기성색소, 헤마톡실린, 에오신, 1% HCl alcohol, 암모니아수

5.결합조직 및 기타 염색

a. 핵심 개념

  • 결합조직 특수염색은 표적 섬유별로 염색법·색이 다름.
  • 기저막 은염색(PAM)은 은거울반응으로 흑색.
  • 핵산·뼈·근·신경 조직별 특수염색 존재.

b. 상세 설명

결합조직 섬유별 염색 ★★핵심

표적염색법
콜라겐(교원섬유)Masson trichrome청색·녹색
콜라겐van Gieson적색(acid fuchsin)
탄력섬유Verhoeff흑색
탄력섬유resorcin-fuchsin(Weigert)흑청색
탄력섬유Unna orcein암갈색(분별 70% 알코올)
세망섬유은염색(Gomori)흑색

삼색염색 비교

염색법아교/교원섬유근섬유·핵비고
Masson trichrome청색(aniline blue)근섬유 적색후고정(매염) Bouin
Van Gieson교원섬유 적색(acid fuchsin)근섬유·적혈구 노란색(picric acid)
Heidenhain AZAN아교·기저막 청색근섬유·핵 적색토리(사구체)신염 진단

세망섬유 도은: 암모니아성 은용액 pH 11~12 → 흑색(호은성). PTAH: hematoxylin : phosphotungstic acid = 1:20, 횡문근육종 확진 유용.

기저막 은염색(PAM)

  • periodic acid methenamine-silver: 콩팥 토리(사구체) 기저막을 흑색 염색(두께·구조 관찰).
  • 과요오드산으로 기저막 탄수화물 산화 → 알데히드기 → 메테나민 은을 금속은으로 환원(은거울반응) → 흑색.

동일 기저막 염색 비교

염색법
PAM흑색
PAS적색
AZAN청색

뼈·근·신경·핵산 조직 염색

표적염색법색/비고
뼈조직(석회화)von Kossa흑색
뼈대근조직PTAH가로무늬
신경조직(닛슬소체)Nissl
축삭·신경원섬유Bodian·은염색
DNAFeulgen 반응적자색
DNA/RNA 동시메틸그린-파이로닌DNA 녹색(Methyl green pH 9)·RNA 적색(Pyronin pH 1.5)
근섬유형ATPase 염색 pH 9.4I형 음성, II형 짙게

c. ★ 시험 포인트

  • 콜라겐(교원섬유)을 청색·녹색으로 염색 → Masson trichrome
  • 세망섬유를 흑색으로 염색 → 은염색(Gomori)
  • 토리(사구체)신염 진단에 유용한 삼색염색 → Heidenhain AZAN
  • 횡문근육종 확진에 유용 → PTAH(1:20)
  • 기저막 은거울반응 흑색 염색 → PAM
  • DNA를 적자색으로 특이 염색 → Feulgen 반응
  • Van Gieson에서 교원섬유의 색 → 적색(acid fuchsin)

d. 한 줄 요약

📌 한 줄 요약: 결합조직 섬유는 표적별로 Masson trichrome·van Gieson·Verhoeff·은염색으로 물들며, 기저막은 PAM(흑색)·PAS(적색)·AZAN(청색)으로 구별된다.

e. 핵심 키워드

핵심 키워드: Masson trichrome, van Gieson, Verhoeff, Gomori 은염색, AZAN, PAM, PTAH, Feulgen

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