part4. 특수염색
(1) 아교섬유·그물섬유·탄력섬유
① 그물섬유(Reticulin) 염색 - Gomori 법
- 그물섬유는 III형 콜라겐으로 H&E 염색으로는 감별 불가, 호은성(argyrophil)을 이용한 도은법으로 증명
- 암모니아성 은 방법으로 염색 시 그물섬유는 흑색, 아교섬유는 황갈색으로 나타남
② 탄력섬유(Elastic fiber) 염색 - Verhoeff 법
- 헤마톡실린의 매염제인 염화제2철(ferric chloride)을 함유한 염색액 사용
③ 반 기에존(van Gieson) 염색
- 아교섬유는 적색(acid fuchsin), 근섬유·세포질은 황색(picric acid)으로 나타남
- 핵염색: pH가 산성이라 해리스 헤마톡실린 대신 바이게르트(Weigert) 철 헤마톡실린 사용
📌 실전 체크 포인트!
그물섬유 염색: 도은법(흑색) / 아교섬유: 황갈색
반 기에존: 아교섬유 적색, 근섬유·세포질 황색
(2) 마송 트리크롬(Masson Trichrome)
① 원리와 결과
- 세포질(작은 염료분자) → 아교섬유(세공이 커 큰 분자 결합) → 아닐린블루 결합 순서로 진행
- 포르말린 고정 후 부앙 용액으로 매염 필요
- 핵염색: 내산성 있는 바이게르트(Weigert) 철 헤마톡실린 사용
| 성분 |
결과 |
| 아교섬유(Collagen) |
청색(blue) |
| 핵(Nuclei) |
흑청색 |
| 세포질·케라틴 |
적색(red) |
| 근섬유 |
적색(red) |
| 적혈구 |
적색(red) |
📌 실전 체크 포인트!
마송 트리크롬: 간·신장 생검 표준 염색
아교섬유 청색, 근섬유 적색 → 종양과 간경변 진단에 유용
(1) 과요오드산 시프 반응(PAS)
① 원리와 목적
- 1:2 글리콜기(CHOH-CHOH)를 과요오드산으로 산화 → 알데히드기 유리 → 시프 시약(Leukofuchsin)과 결합 → 적자색 발색
- 목적: 글리코겐·점액·기저막·진균·아밀로이드 증명
| 성분 |
결과 |
| 글리코겐·점액·기저막·진균 |
적자색(dark reddish purple) |
| 핵 |
청색 |
| 배경 |
연분홍색 |
② 다이아스테이스-PAS(d-PAS)
- 다이아스테이스로 글리코겐만 소화 후 PAS 염색
- PAS 양성이었다가 d-PAS 후 음성이 되면 글리코겐, 계속 양성이면 점액
| 성분 |
PAS |
d-PAS |
| 점액 |
+ |
+ |
| 글리코겐 |
+ |
- |
📌 실전 체크 포인트!
과요오드산을 산화제로 선택하는 이유: 과산화를 일으키지 않아 알데히드기를 보존
시프 시약 검사: 포름알데히드에 몇 방울 → 즉시 연분홍 = 정상, 짙은 청색 = 변질
(2) 알시안블루와 복합염색
① 알시안블루(Alcian blue)
- 염기성 염료로 분자 내 구리이온(Cu²⁺)이 양이온, 산성점액물질(음이온)과 정전기적으로 결합
- pH 2.5: 황산 점액·카르복실 점액 모두 염색, 핵 대조염색은 핵고정 레드(Nuclear fast red)
- pH 1.0: 황산 점액만 염색(카르복실기는 이온화되지 않음)
| pH |
염색 대상 |
결과 |
| pH 2.5 |
모든 산성점액(carboxylated + sulfated) |
청색 |
| pH 1.0 |
황산화 점액(sulfated)만 |
청색 |
② 알시안블루-PAS 복합염색
| 성분 |
결과 |
| 산성점액 |
청색 |
| 중성점액·PAS 양성 성분 |
적자색 |
| 핵·세포질 |
진청색·연분홍 |
📌 실전 체크 포인트!
알시안블루 pH 2.5 vs 1.0: 2.5는 모든 산성점액, 1.0은 황산화만
복합 알시안블루-PAS: 산성점액 청색, 중성점액 적자색으로 동시 감별
(1) 지질 염색
① 일반 원칙
- 지방 고정: 신선한 조직을 바로 동결절편으로 처리함(알코올 고정 불가, 지질 용해)
- 염색 용매: 프로필렌글리콜 또는 아이소프로판올(지질 용해성이 없거나 미세)
- 봉입: 수용성 봉입제 사용(비수용성 봉입제는 염료-지질 결합물을 파괴)
② 오일레드O(Oil red O)
- 목적: 신선 조직에서 중성지방 증명, 지방육종·초기 간질환 감별
- 원리: 지질에 용해되는 염료를 유기용매(propylene glycol)에 녹여 물리적으로 지방에 이행시키는 방법
- 결과: 지방 적색, 핵 청색
③ 나일블루황산염(Nile blue sulfate)
- 목적: 중성지질과 산성지질 감별
- 중성지질(중성지방·콜레스테롤) → 분홍~적색(nile red에 의해), 산성지질(지방산·인지질) → 청색
📌 실전 체크 포인트!
지방 염색은 반드시 동결절편, 수용성 봉입제 사용
Oil red O: 지방 적색 / Nile blue: 중성지질 적색, 산성지질 청색
(2) 내인성 색소와 아밀로이드
① 헤모시데린(철) 염색
- 프러시안블루 반응(ferric ferrocyanide): 철 이온을 HCl로 처리 후 ferrocyanide와 반응 → 청색
- 염색 시 철이 없는 시약·기구 사용, 수돗물 수세 금지(증류수만), 수돗물 사용 시 인공산물 발생
② 아밀로이드(Amyloid) 염색
- H&E 염색: 균일하고 호산성으로 보임
- 콩고레드(Congo red): 아밀로이드 오렌지색, 편광현미경에서 녹색 이중굴절 특이반응
- 이염색성 염료(Crystal violet, methyl violet): 아밀로이드가 변색
- 티오플라빈 T(Thioflavin T): 형광현미경으로 검경
- 박절 두께 10~15 ㎛로 두껍게 박절해야 증명이 쉬움
📌 실전 체크 포인트!
콩고레드: 아밀로이드 오렌지색, 편광 시 녹색 이중굴절(가장 특이적)
프러시안블루: 철(hemosiderin) 청색, 수돗물 수세 금지
(1) 세균·진균 특수염색
① 세균과 진균 염색
| 염색 |
대상 |
결과 |
| PAS |
진균, 기저막 |
적자색 |
| PAMS(주기산-메테나민 은) |
진균, 기저막 |
진균·기저막 흑색 |
| 고모리 그물섬유(암모니아성 은) |
그물섬유(TypeⅢ 콜라겐) |
그물섬유 흑색, 아교섬유 황갈색 |
| 질-닐센(Ziehl-Neelsen) |
항산성균(결핵균) |
항산균 적색, 배경 청색 |
📌 실전 체크 포인트!
진균·기저막 검출: PAS(적자색), PAMS=주기산-메테나민 은(흑색)
PAMS(진균)와 고모리 그물섬유 염색(그물섬유)은 서로 다른 은염색 → 혼동 주의
항산성균: 질-닐센 석탄산푹신 → 적색