part2. 조직처리와 포매
(1) 탈수와 투명
① 탈수
- 고정 후 조직 내 수분을 제거하여 침투제가 잘 침투하게 하는 과정
- 저농도에서 고농도 에탄올 순으로 진행됨(70%→80%→90%→100%)
- 탈수가 불충분하면 파라핀 침투와 중합이 저해
② 투명
- 탈수제(에탄올)를 침투제(파라핀)와 친화성 있는 물질로 치환하는 과정
- 투명제: 크실렌(xylene), 클로로포름, 벤젠
- 크실렌·벤젠은 투명화 작용이 있으나, 클로로포름은 탈알코올제로 쓰이되 조직을 투명하게 하지 않음(육안으로 투명화 확인 불가)
- 투명 후 조직이 반투명하게 변함(완전 투명이 되어야 침투 완료)
📌 실전 체크 포인트!
탈수: 저농도→고농도 에탄올 / 투명: 탈수제를 파라핀과 친화성 있는 물질로 치환
클로로포름은 투명화 작용이 없어 육안 확인 불가(시험 단골 함정)
(2) 침투제
① 침투제 종류
| 침투제 |
특징·용도 |
| 파라핀(비수용성) |
가장 일반화, 진공침투법, 약 60℃에서 침투 |
| 셀로이딘(비수용성) |
3~5주 소요, 큰 조직·뇌·중추신경계 전체 표본 |
| 에폭시 수지(비수용성) |
전자현미경용, 60~90 nm 초박절에 필수 |
| 카르보왁스(수용성) |
효소 증명에 권장, 탈수·투명 불필요 |
📌 실전 체크 포인트!
파라핀 포매의 단점: 알코올·크실렌으로 지질 용해, 60℃ 열로 효소 소실
진공침투법: 폐조직·근육·피부·뼈처럼 치밀한 조직에 이용
(1) 파라핀 포매
① 특징
- 장점: 포매 시간이 짧고 조작이 간편, 약 5 ㎛ 얇은 절편 가능, 보존이 쉬움
- 단점: 지질 용해(알코올·크실렌), 60℃ 열에 의한 효소 소실·조직 경화·수축
(2) 셀로이딘 포매
① 특징
- 장점: 실온 침투·조직 위축 적음·효소 손상 없음·큰 조직 전체 표본 가능
- 단점: 3~5주 침투 소요, 2~3개월 이상 표본 제작 기간, 10 ㎛ 이상으로 두꺼움
- 회전박절기 사용 불가, 슬라이딩 박절기만 사용 가능, 최근 연구용에만 이용
(3) 박절기와 박절 결함
① 박절 결함
| 결함 |
원인 |
| 상처나며 수직으로 갈라지는 리본 |
칼에 흠, 이물질, 조직 내 석회화 |
| 짓눌리고 주름 많은 리본 |
칼날 무딤, 블록 온도 높음 |
| 두꺼웠다 얇아지는 리본 |
칼·블록이 헐겁게 조여짐, 블록이 너무 큼 |
| 조직이 뜯기거나 부스러짐 |
탈수·투명과정 불완전 |
📌 실전 체크 포인트!
파라핀 절편 표준 두께: 약 5 ㎛
부유온수조 온도: 45~50℃(파라핀 융점보다 약간 낮게)