part2. 검사기기학

(1) 빛과 흡광 법칙

① 빛의 종류

• 자외선 (UV) 400 ㎚ 이하, 가시광선 400~800 ㎚, 적외선 (IR) 800 ㎚ 이상
• 빛의 색과 용액의 색은 서로 보색 (여색) 관계 (예: 용액 황색 575~585 → 측정 보라 400~424)

② 비어-람베르트 법칙 (Beer-Lambert)

• 흡광도 (OD) = k × 농도 × 두께, 흡광도 = 2 − log(투과율%)
• 측정 가능 흡광도 범위는 0.1~1.0이며 기기 실측치는 투과도
• 블랭크는 시약 자체 색을 제거하며 측정 전 영점은 흡광도 0, 투과도 100%
• 법칙 불성립: 혼탁·불순물·형광·둘 이상 파장 통과 시

(2) 광도계 구조와 종류

① 기본 구조

• 광원부 → 분광부 → 시료부 → 수광부 → 판독부 순서
• 분광: 프리즘·필터·회절격자 / 시료: 석영(자외·적외)·유리(가시) / 수광: 광전증배관 (PMT, 모든 분광광도계)

② 내부표준물질

• 염광광도계: 리튬 (Li, 인체에 없음·간섭 없음·671 ㎚·적색), 세슘 (Cs)
• 원자흡광광도계: 란타넘 (La), 스트론튬 (Sr)
• 사용 이유: 화학적·물리적·스펙트럼 간섭 제거

(3) 불꽃반응

(1) 원리와 영향인자

① 원리

• 단백질은 양쪽성 (Zwitter ion)이며 등전점 (PI)은 pH 5.0으로 이때 이동이 정지
• 산성 쪽이면 양전하를 띠어 음극으로, 알칼리 쪽이면 음전하를 띠어 양극으로 이동

② 영향인자

• 하전량이 클수록 빠르고 분자량이 클수록 느리며 전압이 높을수록 빠르고 이온강도가 높을수록 느림
• 전기삼투 영향이 큰 분획은 베타·감마 글로불린이며 윅 흐름 (Wick flow)도 분획 위치에 영향을 줌

(2) 지지체와 분획

① 지지체

• 셀룰로오스 아세테이트 (미량 1~3 ㎕·40분·재현성·투명화), 아가로스 (중성·전기삼투 작음)
• 염색: 폰소 에스 (Ponceau S), 아미도 블랙 (Amido Black), 쿠마시 블루 (Coomassie Blue)

② 당단백 분획

• 전기영동 후 과아이오딘산 시프 (PAS) 염색으로 확인하며 알부민 5.3·알파2 34.5·베타 28.9% 분포
• 덴시토그램 병적 소견: 네프로제(알부민↓), 단클론 감마병증(M-peak), 간경변(베타-감마 융합)